项目概况 :

该项目经过多年的潜心研究，目前率先在国际上成功的开发了一整套能高效表达外源基因的汉逊酵母表达系统（17个表达载体）和汉逊酵母高表达基因的密码子用法。研究人员们成功的建立了一整套从表达载体构建到产业化发酵和蛋白纯化的通用技术平台。根据外源基因的种类不同，每升发酵液的表达量可达0.1-10克，非常适合大、中、小规模的企业选用。

该系统可以以多种不同的碳源（甲醇、葡萄糖、甘油）进行诱导发酵，表达产物易于纯化（His-tag标记），表达量高。载体容易操作，是目前为止分子量最小的Hansenula polymorpha表达载体。

该表达平台是国际上最全、最容易操作的Hansenula polymorpha酵母表达系统；建立的Hansenula polymorpha酵母粘膜免疫技术平台在国际上属于首次。

此项目目前处于实验室阶段。

应用状况：

1.粘膜免疫技术平台

本实验室利用已经建立的Hansenula polymorpha表达系统中的pHFMDHZ-α-A分泌型表达载体，表达了mVP1-CTB。其中mVP1为口蹄疫病毒（FMDV）VP1基因上的第21-40，135-160，200-213氨基酸，通过人工合成拼接而成，该基因含有T、B细胞表位，能刺激产生保护性T细胞免疫和体液免疫。CTB为His-tag标记的霍乱毒素B亚单位，它是迄今为止最强的胃肠道免疫原，能和哺乳动物细胞肠上皮细胞上的GM1结合后，刺激粘膜产生以分泌型IgA为主的保护性抗体。表达产物免疫Balb/c小鼠后，能产生高效价的IgG（1：10000）和IgA（1：1000）抗体。并能保护Balb/c小鼠和猪对10⁵ LD50剂量的FMDV-O-type的攻击。建立了Hansenula polymorpha- 粘膜免疫技术平台。该平台用于预防所有通过粘膜和呼吸系统感染的疾病。其中口蹄疫Hansenula polymorpha酵母粘膜免疫技术已经完全成熟,可以直接进行产业化生产。此平台可用于口服或粘膜免疫疫苗的研发。

2.重组外源蛋白工业化生产技术平台

本项目采用目前为止外源真核基因表达量最高的汉逊酵母系统表达了乙肝表面抗原、霍乱毒素无毒亚单位、破伤风毒素C片段、白喉毒素、牛促卵泡激素、a干扰素、粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子、木薯醇晴酶、菊酸乙酯酯酶等基因。采用多拷贝胞内表达和分泌表达等不同的表达方式。发酵诱导后，收获菌体或者表达上清液，经纯化后可获得（纯度>98%）具有生物学活性的外源蛋白。本实验室可提供稳定高效表达的工程菌和发酵条件以及参考的提取工艺。

3.汉逊酵母表面展示系统技术平台

本项目采用GPI为锚定位点，分泌表达的外源蛋白可以被锚定在酵母细胞壁外膜上。目前本实验室采用已经建立的酵母表面展示系统，成功的表达了菊酸乙酯酯酶基因。菊酸乙酯酯酶可以水解菊酸乙酯为菊酸。菊酸是制造绿色农药的重要中间体。

此外，本实验室还开发了一种脂肪酶酵母展示系统，可以催化石油和棉籽油变成柴油。

合作方式：

技术入股